
1.先明确一下,U6 是 pol III 的启动子,不能转录蛋白编码基因,所以题目里的“基因”应该指的是非编码基因。如果勿用了蛋白编码基因,本回答结束。
2.pol III 的启动子 天然状态下只负责 5S rRNA(149bp)、tRNA前体(小于 5S rRNA)。可见,天然状态下,它驱动的大小很小,目前常见的利用 U6 启动子的,比如 siRNA、sgRNA 均在 100bp以内。
3.U6 启动子驱动的序列,在遇到 pol(U) 时会终止,过长的序列也会加大遇见各种终止信号的概率,如果在上述 3000bp 中出现pol(U) 或其他会引起终止的序列,本回答结束。
4.如果想转录出一段长 3000bp 两端没有修饰(5'-cap 和 pol-A 尾)的 RNA,可以用 Pol II 的启动子,两端放上核酶(比如常用的 锤头核酶 和 HDV 核酶)。本回答结束
ps. 因为不长,两个核酶可以直接合到引物里
